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蛋白試劑盒如何進(jìn)行比色法,不懂的請(qǐng)看這兒!
更新時(shí)間:2022-08-12   點(diǎn)擊次數(shù):1486次
  蛋白定量是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)*的一部分。我們?cè)谶M(jìn)行蛋白質(zhì)的許多實(shí)驗(yàn)分析之前都是需要對(duì)蛋白質(zhì)的濃度進(jìn)行測(cè)定,以便確定下游實(shí)驗(yàn)是否能順利進(jìn)行。
  
  蛋白試劑盒是常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一。該方法原理是蛋白質(zhì)在堿性條件中將銅離子(Cu2+)還原為亞銅離子(Cu+),生成的Cu+與BCA形成紫色絡(luò)合物,并在562nm處具有很強(qiáng)的吸收峰,吸光值與樣品中蛋白質(zhì)的含量成正比,根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。
  
  通常蛋白定量常使用的方法是比色法,通常用于總蛋白的定量分析。根據(jù)蛋白和比色試劑的結(jié)合,可以將比色法分為:蛋白-染料結(jié)合法和蛋白-銅螯合化學(xué)試劑法。
  
  典型的蛋白試劑盒比色法是考馬斯亮藍(lán)G250染料結(jié)合法,后者則包括雙縮脲法,Lowry法,二喹啉甲酸(BCA)法。
  
  1、Bradford法
  
  考馬斯亮藍(lán)G250染料結(jié)合法由MarionBardford博士在1976年提出,因此也叫Bradford法,原理是蛋白在酸性條件下和考馬斯染料結(jié)合,染料的吸收值發(fā)生改變,從465nm轉(zhuǎn)移為610nm,并且在595nm處有的吸收差異。
  
  結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上的染料數(shù)與蛋白所帶正電荷成正比,因此可以用該方法來對(duì)蛋白進(jìn)行定量。染料的顏色變化和蛋白中的堿性氨基酸有關(guān),另外范德華力和疏水作用也會(huì)影響蛋白與染料的結(jié)合。
  
  2、BCA法
  
  1985年P(guān)aulK.Smith等人開發(fā)出BCA方法,該方法分為兩步:首先,在堿性條件下,蛋白將二價(jià)銅離子還原為一價(jià)銅離子,然后,BCA和一價(jià)銅離子結(jié)合,形成紫色化合物,該化合物在562nm時(shí)有吸收,且吸收值與蛋白濃度呈線性相關(guān)。
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